重组 4-二磷酸胞苷基-2-C-甲基-D-赤藓糖醇 (CDP-MEP) 激酶 (IspE),具有 C 端 His 标签,使用 Ni-NTA 柱层析从大肠杆菌中纯化。 甲基赤藓糖醇磷酸 (MEP) 途径被大多数细菌(包括所有革兰氏阴性细菌)用于异戊二烯类生物合成。异戊二烯类化合物是自然界中发现的最多样化的化合物之一。迄今为止,已鉴定出超过50,000种不同的异戊二烯类化合物,它们表现出广泛的结构复杂性,并参与多种生物学功能[1]。电子传递(醌)、细胞膜稳定(类糖醇和甾醇)、细胞壁生物合成(多酚)、信号转导(异戊二烯化蛋白)、光合作用(叶绿素)和tRNA修饰是涉及异戊二烯类化合物的过程[2]。异戊烯基二磷酸酯(IPP)和二甲基烯丙基二磷酸酯(DMAPP)是所有异戊二烯类化合物的前体,自然界中存在两种不相关的生物合成基本途径。这两种前体由甲羟戊酸 (MVA) 或 MEP 途径产生。MVA 通路主要存在于真核生物和古生物中,包括人类、植物胞质溶胶和一些革兰氏阳性细菌,而 MEP 通路被大多数细菌(包括所有革兰氏阴性菌)和植物叶绿体利用。由于这种自然分布,MEP途径是开发新型抗菌剂和除草剂的一个有前途的靶点[3]。 在MEP途径的第四步中,4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇(CDP-ME)在ATP依赖性反应中被CDP-ME激酶(IspE)转化为4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤藓糖醇-2-磷酸(CDP-MEP)。CDP-MEP的形成与ATP的消耗以1:1的比例发生。通过测量ATP水平的降低,用户可以推断出CDP-MEP的产生量并监测IspE的活性。 存储 将产品储存在 -20°C 以下冷冻。 酶在 -20°C 下作为未稀释的储备液可稳定保存至少 6 个月。冷冻在工作等分试样中,以避免反复解冻和冷冻 |